Actividad de bacteriocina PsVP-10 producida por pseudomonas sp.R-10 sobre streptococcus mutansy streptococcus sobrinus.

Abstract

En el siguiente estudio se analizo la capacidad bactericida in vitro de una sustancia antibacteriana elaborada por Pseudomona sp R-10 denominada Bacteriocina PsVP-10, aislada de sedimento de pozo de agua, sobre cepas de S. mutans, con el fin de determinar la CMI de este agente. Una vez determinada la CMI, fue estudiada la velocidad de muerte de esta bacteriocina comparando cepas de S. mutans y S. sobrinus. Para determinar la CMI de bacteriocina PvVP-10, se probaron concentraciones distintas siguiendo el método propuesto por Ericsson y Sherris, utilizando la unidad de medida de µg/ml, debido a que es universalmente empleada para determinar CMI de agentes antimicrobianos (Ericsson, H.M. and Sherris, J., 1971). Se utilizaron 46 colonias de S. mutans cultivadas en medio agar TYCSB, aisladas a partir de muestras de saliva de pacientes atendidos en las Clínicas Odontológicas de la Universidad de Talca de edades y géneros distintos. Estas cepas fueron subcultivadas en caldo BHI (Merk) a 37ºC por 48 horas, evidenciándose crecimiento bacteriano por turbiedad del medio, la cual se ajusto a MacFarland nº 3. Posteriormente alícuotas de 5 µl de caldo fueron sembradas en placas con medio TYSCB, remplazando bacitracina del medio original por bacteriocina PsVP-10 en 9 concentraciones diferentes 0.5, 1.0, 2, 4, 8, 16, 32, 64 y 128 µg/ml. Las placas fueron cultivadas a 37ºC por 48 horas en anaerobiosis con el objeto de evidenciar crecimiento bacteriano. Los resultados obtenidos en este experimento determinaron que una concentración de 2 µg/ml de bacteriocina PsVP-10 son suficientes para suprimir el crecimiento de las 46 100% cepas bacterianas testeadas. Una vez determinada la CMI de bacteriocina PsVP-10 sobre cepas de S. mutans, se procedió a analizar velocidad de muerte de 5 cepas de S. sobrinus y 5 de S. mutans, elegidas a partir de las 46 cepas iniciales e identificadas por técnica PCR. Para esto, las cepas fueron sembradas separadamente en tubos con caldo BHI e incubadas a 37ºC por 24 horas en anaerobiosis. A continuación los cultivos fueron diluidos hasta obtener 105 ufc/ml, luego se agregó 2 µg/ml de bacteriocina para posteriormente sembrarlas inmediatamente, tiempo 0, en placas petri con medio TYCSB e incubadas a 37ºC por 24 horas en anaerobiosis para realizar recuento bacteriano. Este ensayo fue repetido para cada cultivo a 30, 60, 120, 180, 240 y 300 segundos respectivamente. Los resultados nos indican que a los 60 segundos en ambas cepas el recuento disminuye drásticamente 99%. Es importante manifestar que se detectó diferencias significativa (p= 0,002) entre ambas cepas con respecto al recuento. Las cepas de S. sobrinus resultaron más resistentes que los S. mutans entre los 30 y 120 segundos del experimento. A los 5 minutos el recuento en ambas especies disminuye en un 99,99%. Estos resultados muestran a la bacteriocina PsVP-10 como un agente efectivo contra el S. mutans y S. sobrinus, su posible uso como antibacteriano en el combate de la caries dental debe ser avalado por más estudios.