Estandarización de un método de precipitación selectiva para el aislamiento de lipoproteínas de baja densidad y evaluación de susceptibilidad oxidativa

Abstract

La modificación oxidativa de las lipoproteínas de baja densidad (LDL) es reconocida como uno de los procesos que más se relacionan con la aterogénesis, y es por esto que en el laboratorio clínico su determinación ha tomado importancia. El método de referencia para su medición (ultracentrifugación diferencial) no es del todo accesible y no puede ser aplicado en varias muestras. El objetivo de este estudio fue estandarizar un método alternativo, de menor costo y con bajo requerimiento de equipos, para aislar LDL de plasma sanguíneo, y posteriormente evaluar su susceptibilidad oxidativa. Resultados: Se logró aislar LDL de plasma humano por precipitación selectiva con heparina y resuspensión en Tritón X-100 0,01% en NaCl 50 g/L. La peroxidación lipídica fue determinada por la formación de sustancias reactivas del ácido tiobarbitúrico (TBARS) luego de inducir la oxidación al incubar las muestras con Cu2+, y EDTA. Se realizó un ensayo de cinética de oxidación con Cu2+ como catalizador de la oxidación, en donde se observó un patrón de tres fases (latencia, propagación y descomposición). Al agregar Cu2+ a las muestras, la formación de TBARS aumentó significativamente (p < 0,05), mientras que al agregar EDTA la peroxidación lipídica disminuyó (p < 0,05). Al agregar Cu2+ + EDTA la formación de TBARS también disminuyó significativamente comparando con el Cu2+ por sí solo (p < 0,05). Conclusión: Se presenta un método más rápido, sencillo y reproducible para aislar lipoproteínas de baja densidad desde volúmenes pequeños de plasma sanguíneo, y así poder evaluar la susceptibilidad oxidativa de la LDL.