Determinación del tiempo óptimo de fijación con formalina 10% tamponada, para la expresión de citoqueratina 5/6 en lenguas de ratones Balb-c mediante inmunohistoquímica

Abstract

Introducción. La formalina 10% tamponada es el fijador químico más ampliamente utilizado en histología, sin embargo, el tiempo de fijación óptimo para tejidos, no ha sido determinado claramente. Citoqueratinas 5/6 (CKs 5/6) son proteínas constitutivas presentes en epitelio oral, cuya expresión es relevante para el adecuado diagnóstico histopatológico.En consecuencia, ésta investigación busca determinar el tiempo óptimo para obtener la máxima inmunoexpresión de CKs 5/6 en epitelio oral de muestras histológicas de ratones Balb-c del Bioterio de la Universidad de Talca, en el año 2016. Metodología: El presente estudio experimental, incluyó un total de 42 muestras correspondientes a lenguas de ratones Balb-c que fueron mantenidos en el Bioterio de la Universidad de Talca. Las muestras obtenidas posteriores a la disección de los animales, fueron fijadas en FT 10% en 14 tiempos. Por cada tiempo establecido se evaluaron 3 muestras, previamente codificadas. Una vez procesadas histológicamente, se identificaron CKs 5/6 mediante inmunoperoxidasa, con posterior contraste con hematoxilina de Harris. Posteriormente se evaluaron 3 áreas de 40.000μm2 representativas en cada muestra, para cuantificar la expresión de CKs 5/6, utilizando el software Image J 1.50i. Resultados. Posterior al análisis estadístico y tras realizar comparaciones posteriores, se obtiene el tiempo 5 (48 horas) como el que presenta mayor inmunotinción. Se destacan además tiempos estadísticamente significativos de 12 horas y 3 días, los que siguen en forma descendente, al tiempo 5 en cuanto a inmunorreactividad. Finalmente, se destaca 7 horas como aquel que no presenta inmunotinción, asociado al breve tiempo de fijación. Conclusión. Este estudio sugiere que el tiempo óptimo para fijar una muestra de biopsia y su análisis posterior, es de 48 horas.