Transferencia genica de DNA plasmidial de Shigella Flexneri bactiriogenica a E. coli HB-101, DH-5cx, JM-107, BI-21 GOLD mediante transformacion clasica y electrotransformacion.

Abstract

La cepa de Sh. flexneri B, aislada desde un cuadro de diarrea aguda en niños, es productora de bacteriocina activa contra B. fragilis y E.coli. Mediante lisis alcalina de Sh. flexneri B bacteriocinogénica se determinó que esta cepa era portadora de varias bandas de DNA plasmidial. Los plasmidios totales purificados, fueron utilizados como material transformantes de diferentes tipos de E.coli (DH-5a, HB-101, JM-107 y BL-21 gold). Para los ensayos de transformación se utilizaron los métodos de Cohen y electroporacion. De acuerdo a los resultados se observó que solamente la electroporacion de E.coli HB-101 pudo originar células transformantes. La posterior lisis alcalina de esta cepa permitió observar la presencia de un plasmidio de aproximadamente 3500 pb. El análisis bacteriocinogénico de la cepa transformante permitió evidenciar la síntesis de bacteriocina. La posterior curación de la cepa transformante, mediante tratamiento con novobiocina, y su consecuente pérdida de la capacidad bacteriocinogénica permitió comprobar que el mencionado plasmidio sería el responsable de la codificación genética de esta sustancia antibacteriana.