Obtencion y evaluacion de antigeno para el diagnostico serologico en pacientes con queratitis por Acanthamoeba spp

Abstract

Acanthamoeba spp. es un tipo de ameba de vida libre, distribuida de forma ubicua en el ambiente. Cuando está en fase de trofozoíto puede infectar la córnea, principalmente de pacientes usuarios de lentes de contacto, causando una inflamación grave, denominada queratitis, que en algunos casos termina en pérdida de visión. e han reportado porcentajes de diagnóstico de esta infección, mediante cultivo en agar no nutriente, entre un 57 y un 70 %, el que tiene además, la desventaja del gran tiempo de espera de los resultados (8 días) y el tipo de muestra, raspado o biopsia de córnea, que debe ser tomada por un oftalmólogo, procedimiento doloroso y a veces traumático. Mientras más tarde en realizarse el diagnóstico y el tratamiento adecuado, peor pronóstico presenta el paciente, por esto es de vital importancia detectar precozmente el agente causal de la enfermedad. El objetivo principal de este trabajo fue mejorar la eficiencia del diagnóstico de la infección por Acanthamoeba spp en pacientes con queratitis, mediante la búsqueda de anticuerpos con la técnica de electroinmunotransferencia (Western blot). Para esto, se aisló una cepa de Acanthamoeba, obtenida desde un cultivo positivo de un paciente con queratitis y se hizo crecer en un medio axénico para esta ameba, PYG. Desde la cepa pura, se preparó un antígeno de tipo soluble para la técnica de electroinmunotransferencia. Mediante ésta, se obtuvo el patrón diagnóstico de los sueros de pacientes que tenían cultivo positivo. Siendo las bandas de 100, 70, 65 y 60 kDa., las de mayor importancia y que permiten predecir de manera significativa, la presencia o ausencia de esta enfermedad. Esta técnica, permitirá diagnosticar un porcentaje importante de los pacientes con una simple muestra de suero, en el mismo día de la toma de muestra y con un 94% de especificidad diagnóstica.