Metabolitos secundarios de los hongos fitopatogenos Chondrostereum purpureum y Nectria galligena: actividad antimicrobiana y herbicida

Abstract

Seis aislados de Nectria galligena y siete de Chondrostereum purpureum se obtuvieron a partir de muestras de madera infectadas por estos microorganismos, recolectados en huertos frutales de las Regiones VI y VII de Chile. Los aislados se cultivaron en tres medios liquidos diferentes: papa-glucosa (PG), extracto de malta-glucosa-peptona (MGP) y levadura-extracto de malta-glucosa (YMG). Una vez consumida la fuente carbonada del medio, los cultivos se extrajeron con acetato de etilo. Los extraibles se evaluaron como antimicrobianos y herbicidas. Los dos aislados de cada hongo con mejor rendimiento y bioactividad, se cultivaron a escala preparativa para aislar e identificar los metabolitos secundarios bioactivos. Los extractos seleccionados fueron los aislados “El Olivar” y “Requinoa” de N. galligena y “Damasco” y “manzano 2” de C. purpureum. Estos hongos fueron cultivados a escala preparativa en los medios PG y MGP. De estos microorganismos se aislaron 14 metabolitos secundarios los cuales fueron caracterizados por metodos espectroscopicos. A partir de los cultivos de N. galligena se aislaron coletorina B, coletoclorina B, ilicicolina C, ilicicolina E, ilicicolina F y α,β-dehidrocurvularina, informadas por primera vez a partir de este hongo. De C. purpureum se obtuvieron el sesquiterpeno acido condrosterpurico, que corresponde a un nuevo esqueleto quimico, los sesquiterpenos sterepolido, dehidrosterepolido, 8-hidroxidihidrosterepolido (descrito por primera vez), echinolactona A y los fenolicos halogenados (3-cloro-4-metoxifenil)metanol, 3- cloro-4-metoxibenzaldehido y (2,4-dicloro-3-metoxifenil)metanol (descrito por primera vez). De estos, solo se habia informado con anterioridad el aislamiento de sterepolido y del dehidrosterepolido a partir de C. purpureum. Todos los metabolitos aislados fueron evaluados como agentes antimicrobianos sobre Erwinia carotovora, Pseudomonas syringae, Alternaria alternata, Botrytis cinerea, Paecilomyces variotii, Penicillium notatum y Mucor miehei. El efecto fitotoxico de los metabolitos se evaluo sobre semillas de Lactuca sativa y Panicum millaceum. Se determino la actividad inhibitoria de los metabolitos sobre las enzimas acetilcolinesterasa, β-Dglucosidasa y β–D-glucuronidasa. La citotoxicidad de los metabolitos fue determinada sobre una linea celular permanente derivada de fibroblastos de pulmon humano. Todos los compuestos fueron inactivos como inhibidores de la germinacion de esporas de B. cinerea, con IC50 superior a 250µg/ml. Los compuestos aislados de C. purpureum fueron activos inhibidores de la germinacion de esporas de A. alternata con valores de IC50 de 15,6 y 31,3 µg/ml, similares a los del fungicida Myclobutanil (IC50 de 31,3 µg/ml) e inferiores a Iprodione (IC50 de 3,9 µg/ml). En estas condiciones experimentales, el nuevo sesquiterpeno acido condrosterpurico presento una IC50 de 125 µg/ml. La actividad antibacteriana sobre E. carotovora fue debil para la mayoria de los metabolitos, con valores de IC50 superiores a 250 µg/ml, excepto 8- hidroxidihidrosterepolido y sterepolido, que presentaron IC50 de 112 y 125 µg/ml, respectivamente, similares a los de penicilina G (IC50 de 122,7 µg/ml). El efecto de los metabolitos como antifungicos sobre P. notatum fue moderado a debil. El mejor efecto sobre P. varioti se observo para ilicicolina F, ilicicolinaC, echinolactona A y dihidrosterepolido, con un diametro de inhibicion de 18 mm a 50 µg/disco, inferior al del control Myclobutanil, con un halo de inhibicion de 30 mm a la misma dosis por disco de antibiograma. Los metabolitos aislados de N. galligena mostraron moderada actividad inhibidora de las enzimas acetilcolinesterasa y β–D-glucuronidasa. Entre los metabolitos aislados, la mayor actividad fitotoxica fue observada para α,β- dehidrocurvularina, inhibiendo significativamente la longitud de la radicula de L. sativa, asi como la longitud del epicotilo de plantulas de lechuga y mijo