Inducción de anticuerpos antifosfolípidos en ratones c57bl/6 por inmunización con beta 2 glicoproteína I humana

Abstract

Los anticuerpos antifosfolípidos se encuentran presentes en el síndrome antifosfolípidos primario, enfermedades autoinmunes y otras afecciones. Además, se han asociado a procesos de trombosis arterial o venosa, trombocitopenia y pérdidas fetales recurrentes. Estos anticuerpos se unen a proteínas con afinidad por los fosfolípidos aniónicos presentes en membranas celulares como la β-2Glicoproteína I (β2GPI). El propósito de esta tesis es obtener anticuerpos anti-β2GPI desde ratones C57BL/6 previamente inmunizados con la proteína purificada desde plasma humano normal. Además, la purificación de β2GPI se realizó mediante dos métodos de los cuales se determinó el que era capaz de aislar mayor cantidad de la proteína. En la primera técnica se utilizó una precipitación con ácido perclórico y posteriores centrifugaciones y concentraciones del purificado y en la segunda técnica se realizó la precipitación con acido perclórico y sulfato de amonio con posteriores centrifugaciones y concentraciones del purificado. Para luego ser utilizada una columna de afinidad de heparina agarosa en ambos métodos. Las técnicas de purificación fueron evaluadas por electroforesis en gel de poliacrilamida. Se inmunizaron ratones C57BL/6 con β2GPI previamente purificada a los cuales se les valoró su capacidad inmunogénica con la determinación de la presencia de anticuerpos con especificidad anti- β2GPI mediante una ensayo de ELISA y Western Blot. El método de purificación de β2GPI donde se utilizó ácido perclórico como agente precipitante de las proteínas y NaCl 1M como solución eluyente en la columna de afinidad,es más eficaz como método de purificación de β2GPI desde plasma humano normal. Además, es posible inducir la producción de anticuerpos antifosfolípidos con especificidad anti-β2GPI en ratones C57BL/6 inmunizados con la proteína purificada. Se llegó a estas conclusiones por medio de los resultados obtenidos en los ensayos de Electroforesis en gel de poliacrilamida de los purificados, ELISA-β2GPI e inmunoelectroforesis o “Western Blot para detección de los anticuerpos inducidos.